La PCR est l’abréviation anglophone de « Polymerase Chain Reaction ». C’est une technique de biologie moléculaire permettant l’amplification d’une partie spécifique d’acide nucléique connue (ADN ou ARN).

Cette technique a la particularité d’utiliser une très faible quantité d’acide nucléique (de l’ordre du nanogramme) et d’arriver à une quantité relativement importante (facteur de multiplication de l'ordre du million).

Une PCR se déroule en 4 étapes.

PCR

Activation de l’enzyme – 5 à 15 min à 95°C

Dénaturation d’ADN

Cette étape sépare les 2 brins complémentaires de l’ADN génomique, elle se déroule la plus part du temps entre 93 et 98 °C pendant 30 s à 2 min. Elle est indispensable pour l'étape « d'hybridation ».

L'hybridation

C’est à cette étape que chacune des 2 amorces va se fixer sur son brin d'ADN génomique. C'est grâce à leur petite taille que les amorces s'hybrident avant le réappariment des 2 brins d'ADN génomique complémentaires. Elle est réalisée proche des températures d'hybridation des 2 amorces, souvent entre 50 et 60°C et dure 30 à 45 secondes. Cette température d'hybridation des amorces est dépendante de la composition et peut être calculée par la formule suivante:

Tm = 2x(A+T)+ 4x(G+C)]

Elongation

C’est la phase où l’ADN polymérase se fixe sur l'amorce hybridée et synthétise un brin d’ADN complémentaire de l'ADN génomique. La synthèse se fait dans le sens 5' --> 3' par rapport à l'amorce .L'étape dure entre 15s et 2 min à 72 °C.

L'ensemble des étapes 2 à 4 est appelé cycle. Pour obtenir une quantité significative d'ADN amplifié, il faut réaliser 25 à 40 cycles.Ces étapes sont automatisées dans une machine appelée thermocycleur.

A chaque cycle, le nombre de copies présentes est doublé.

La PCR nécessite l'utilisation de différents réactifs

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